? 在高效液相色譜（HPLC）或超高效液相色譜（UHPLC）實(shí)驗(yàn)中，液相色譜儀的柱壓穩(wěn)定是獲得可靠數(shù)據(jù)、保護(hù)昂貴色譜柱和儀器硬件的基石。一旦壓力出現(xiàn)異常波動(dòng)（忽高忽低、持續(xù)上升或下降、劇烈跳動(dòng)），不僅直接影響分離效果和定量準(zhǔn)確性，更可能是系統(tǒng)潛在問(wèn)題的預(yù)警信號(hào)。深入理解液相色譜儀壓力不穩(wěn)定的根源，對(duì)于高效排障和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行至關(guān)重要。

一、 氣泡問(wèn)題：壓力波動(dòng)的“元兇”之一

1. ?流動(dòng)相脫氣不充分： 這是最常見原因。溶解在流動(dòng)相（尤其水相或混合相）中的氣體，在液相色譜儀泵的高壓或檢測(cè)器流通池的低壓環(huán)境下析出形成微小氣泡。氣泡通過(guò)泵時(shí)被壓縮，導(dǎo)致壓力瞬間下降；通過(guò)檢測(cè)器則引起基線噪音和峰形異常。解決方法：務(wù)必對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行充分脫氣（在線脫氣機(jī)、氦氣鼓泡、超聲）。

2. ?系統(tǒng)泄漏引入空氣：

泵前低壓端泄漏： 溶劑瓶與泵之間的管路、過(guò)濾頭、在線脫氣機(jī)出口、泵的入口單向閥密封圈等處發(fā)生微小滲漏，會(huì)吸入空氣。表現(xiàn)為壓力大幅波動(dòng)、跳動(dòng)劇烈，常伴隨泵的異響（咔嗒聲）和溶劑流出不連續(xù)。仔細(xì)檢查并擰緊所有低壓接頭，更換老化密封圈。

泵頭密封圈磨損或污染： 高壓泵的柱塞桿密封圈老化、磨損或污染，會(huì)導(dǎo)致泵腔內(nèi)密封不嚴(yán)，產(chǎn)生微小氣泡或液體滲漏，引起壓力不穩(wěn)和跳動(dòng)。需定期維護(hù)更換密封圈。

3. ?泵頭內(nèi)有氣泡： 更換溶劑或維護(hù)后，泵頭內(nèi)未完全排空氣泡。執(zhí)行徹底的泵灌注和排氣程序至關(guān)重要。

二、 溶劑與流動(dòng)相問(wèn)題

1. ?溶劑比例變化/混合不均： 使用多元梯度時(shí)，不同溶劑的粘度、壓縮性差異大。如果比例閥切換不精準(zhǔn)或混合器效率低，短時(shí)間內(nèi)流動(dòng)相組成未達(dá)均一，導(dǎo)致液相色譜儀壓力波動(dòng)。梯度結(jié)束后的壓力應(yīng)能回到初始值附近。

2. ?鹽析出或結(jié)晶： 使用高濃度緩沖鹽（特別是磷酸鹽）時(shí)：

流動(dòng)相蒸發(fā)/溶劑比例變化： 溶劑瓶密封不嚴(yán)導(dǎo)致?lián)]發(fā)，或梯度運(yùn)行中水相比例過(guò)高，可能使鹽濃度局部飽和而析出，堵塞管路或在線混合器，引起壓力異常升高或波動(dòng)。

停機(jī)后沖洗不充分： 含鹽流動(dòng)相在系統(tǒng)內(nèi)殘留，水分蒸發(fā)后結(jié)晶堵塞系統(tǒng)。務(wù)必用足夠比例的高純水徹底沖洗系統(tǒng)。

3. ?溶劑互溶性差： 在梯度起始或結(jié)束階段，如果兩種溶劑（如正己烷和甲醇水）互溶性不佳，會(huì)形成微小液滴或不均一相，通過(guò)泵時(shí)引起壓力波動(dòng)和噪音。優(yōu)化溶劑選擇或調(diào)整梯度程序。

4. ?流動(dòng)相污染/長(zhǎng)菌： 水相或緩沖液被微生物污染或含有顆粒雜質(zhì)，可能堵塞濾頭或在線過(guò)濾器，造成壓力緩慢升高或不穩(wěn)。使用新鮮、過(guò)濾的流動(dòng)相，定期更換溶劑。

三、 色譜柱相關(guān)問(wèn)題

1. ?色譜柱堵塞： 這是導(dǎo)致壓力持續(xù)升高的最常見原因。

樣品殘留/強(qiáng)保留物質(zhì)吸附： 復(fù)雜樣品中的強(qiáng)保留組分或顆粒物在柱頭累積，堵塞篩板或填料間隙。表現(xiàn)為主峰前移、拖尾、柱效下降。加強(qiáng)樣品前處理（過(guò)濾、凈化），使用保護(hù)柱，定期沖洗再生色譜柱。

填料塌陷/柱床空隙： 柱壓受到劇烈沖擊或長(zhǎng)期在超壓邊緣運(yùn)行，可能導(dǎo)致填料塌陷或柱床產(chǎn)生空隙，引起壓力波動(dòng)、峰分叉或拖尾。需輕柔操作，避免壓力沖擊。

2. ?柱溫波動(dòng)： 液相色譜儀的柱溫箱控溫不精準(zhǔn)或環(huán)境溫度變化大，導(dǎo)致柱溫波動(dòng)。溫度變化直接影響流動(dòng)相粘度和柱內(nèi)阻力，從而引起壓力漂移或波動(dòng)。確保柱溫箱工作正常，環(huán)境穩(wěn)定。

四、 泵與比例閥故障

1. ?單向閥故障： 泵入口或出口單向閥的寶石球或閥座被污染（鹽結(jié)晶、顆粒物、微生物）、磨損或卡住，導(dǎo)致密封不嚴(yán)或延遲關(guān)閉。這是造成壓力大幅跳動(dòng)、甚至歸零的常見硬件原因。可嘗試超聲清洗單向閥，嚴(yán)重時(shí)需更換。

2. ?比例閥故障/泄漏： 控制不同溶劑通道的比例閥內(nèi)部磨損、密封失效或驅(qū)動(dòng)故障，導(dǎo)致實(shí)際混合比例與設(shè)定不符，或溶劑滲漏，引起壓力波動(dòng)和保留時(shí)間漂移。需專業(yè)診斷和維修。

3. ?密封圈磨損/泄漏： 泵柱塞桿密封圈、閥轉(zhuǎn)子密封圈等關(guān)鍵密封件老化磨損，造成內(nèi)部泄漏或外部滲液，直接影響泵的輸液精度和壓力穩(wěn)定。需按維護(hù)計(jì)劃定期更換。

4. ?泵頭內(nèi)部污染/損壞： 泵頭內(nèi)部流路或混合器被污染或發(fā)生物理?yè)p壞，影響溶劑輸送的平穩(wěn)性。

五、 系統(tǒng)堵塞

1. ?在線過(guò)濾器/保護(hù)柱/進(jìn)樣器濾芯堵塞： 這些耗材是保護(hù)色譜柱的第一道防線，也是最易堵塞的點(diǎn)。顆粒物、樣品殘留、鹽結(jié)晶或微生物都可能在此積累，導(dǎo)致壓力緩慢或急劇升高。定期檢查、清洗或更換這些耗材。

2. ?管路（特別是細(xì)徑管路）堵塞： UHPLC系統(tǒng)或連接檢測(cè)器的毛細(xì)管路內(nèi)徑極小，極易被微小顆粒堵塞。確保所有溶劑和樣品都經(jīng)過(guò)適當(dāng)過(guò)濾（如0.22 μm或更小孔徑濾膜）。

六、 其他因素

1. ?檢測(cè)器流通池堵塞或污染： 流通池內(nèi)污染或形成氣泡，會(huì)增加背壓，影響整個(gè)液相色譜儀系統(tǒng)的壓力讀數(shù)。

2. ?自動(dòng)進(jìn)樣器問(wèn)題： 進(jìn)樣針部分堵塞、六通閥轉(zhuǎn)子密封圈磨損或定量環(huán)連接處泄漏，可能在進(jìn)樣瞬間或進(jìn)樣后引起壓力擾動(dòng)。

3. ?系統(tǒng)壓力傳感器故障： 壓力傳感器本身出現(xiàn)漂移或故障，會(huì)給出錯(cuò)誤讀數(shù)。相對(duì)少見，但需考慮。

液相色譜儀壓力波動(dòng)的排查步驟建議

1. ?觀察現(xiàn)象： 壓力波動(dòng)模式（跳動(dòng)、緩升緩降、持續(xù)上升/下降）、發(fā)生時(shí)機(jī)（等度/梯度、運(yùn)行開始/結(jié)束、進(jìn)樣前后）、是否伴隨基線噪音或峰形異常。

2. ?簡(jiǎn)化系統(tǒng)： 斷開色譜柱，用兩通連接器連接泵出口和檢測(cè)器入口（或直接連至廢液），觀察壓力。如波動(dòng)消失，問(wèn)題可能在色譜柱或保護(hù)柱。

3. ?檢查流動(dòng)相與脫氣： 確認(rèn)流動(dòng)相新鮮、過(guò)濾、充分脫氣。檢查溶劑瓶蓋密封性，確保吸濾頭浸沒(méi)在液面下。

4. ?檢查低壓管路與接頭： 仔細(xì)檢查泵前所有管路、接頭、過(guò)濾頭、在線脫氣機(jī)出口等是否有滲漏（尤其注意泵入口單向閥附近）。可輕微拉動(dòng)管路看是否有液滴滲出。

5. ?泵排氣與檢查： 執(zhí)行泵灌注和排氣程序。檢查泵頭是否有滲漏，聽泵運(yùn)行聲音是否異常。

6. ?檢查與清洗/更換耗材： 檢查并清洗或更換在線過(guò)濾器、保護(hù)柱、進(jìn)樣針/針座濾芯。嘗試清洗單向閥。

7. ?分段測(cè)試： 依次連接不同組件（如只接泵和混合器；再接自動(dòng)進(jìn)樣器；再接色譜柱；再接檢測(cè)器），觀察壓力變化，定位問(wèn)題區(qū)間。

8. ?色譜柱維護(hù)： 根據(jù)色譜柱類型，使用合適的強(qiáng)溶劑進(jìn)行沖洗再生。如無(wú)效，考慮更換保護(hù)柱或色譜柱。

9. ?考慮溫度與環(huán)境： 確保柱溫箱工作正常，儀器遠(yuǎn)離空調(diào)出風(fēng)口等溫度變化大的地方。

10. 尋求專業(yè)支持： 若以上步驟無(wú)法解決，可能是比例閥、壓力傳感器或其他內(nèi)部精密部件故障，需聯(lián)系液相色譜儀廠家工程師進(jìn)行專業(yè)診斷和維修。

? 掌握液相色譜儀壓力波動(dòng)的深層誘因，如同掌握了解讀儀器狀態(tài)的密碼。 通過(guò)系統(tǒng)性地排查氣泡、流動(dòng)相、色譜柱、硬件等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，不僅能快速解決眼前問(wèn)題，更能提升對(duì)儀器整體狀態(tài)的把控能力。每一次穩(wěn)定的壓力曲線背后，都是對(duì)細(xì)節(jié)的嚴(yán)謹(jǐn)掌控與對(duì)儀器的精心呵護(hù)。 定期維護(hù)、規(guī)范操作、及時(shí)排障，方能確保您的液相色譜儀持續(xù)高效運(yùn)轉(zhuǎn)，為科研與質(zhì)控提供堅(jiān)實(shí)可靠的數(shù)據(jù)基石。

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